基因型鉴定的方法有哪些?很多网友在网上发帖询问基因鉴定的常规方法有哪些。在选择基因型鉴定之前,要时刻了解基因型鉴定,这是合理的。今天我们来看看基因型鉴定的方法。
基因型鉴定的方法是什么?
1.第二代测序IGV观察/callSNP软件分析
原理:设计各种标签序列(F方向和R方向)的组合,使不同的组合对应不同的样本。根据测序导出reads上的标签序列,区分测序结果中的样本。一个测序可以获得多个样本数据,测序信息量不需要太高,可以是1-2G,然后突变类型和纯杂合可以根据测序结果与参考序列的匹配情况和reads的比例来判断;
优点:通量大,单个样品成本低,可以识别单个位点存在的各种突变类型;
缺陷:结果反馈速度慢,一般需要两个星期左右才能得到结果,不适合检查样本量。
2.DSDEcodeM分析第一代测序文件的测序文件。
原理:软件根据测序信号峰值双峰嵌套位置和强度来判断突变类型;
优点:速度快,第一代测序结果一般可以在第二天得到,软件分析速度快;
缺点:单个样本成本高,不适合大样本量检验。当位点有两种以上的突变类型时,测序峰值混乱,手动和软件无法很好的区分。
3.KASP
原理:用不同的荧光标记不同的引物(两个引物的尾部有一个SNP变异),PCR延伸后会传出不同的闪光,基因型是根据闪光值来判断的;
优点:检测速度快(扩展时间短),通量大(一次96板QPCR仪);
缺陷:试剂成本高,仪器设备昂贵,仅适用于检测单位点SNP变异,序列变异情况不明确,适用范围窄。
4.dCAPs
原理:在已知序列变异的情况下,利用突变形成的酶切位点对突变位点的PCR扩张产品进行酶切检测,突变情况根据酶切结果进行判断。
优点:成本低(单个样本只需要0.1ul酶),通量大(可以同时检测出大量类似突变的样本),周期短(PCR扩张增加酶切割后电泳一天即可完成)。;
缺陷:在选择合适的内切酶之前,需要对突变位点进行序列状态,有些内切酶可能并不常见。
5.SSR分析
原理:基因型根据杂带大小的不同进行分析;
优点:检测速度快,通量大,可检测1bp长度差(建议3bp以上);
缺陷:试剂成本较高(使用专业分析仪),仅用于检测已知碱基缺失的突变位置。
基因型鉴定的原理
人类基因组的一部分是22对常染色体和1对性染色体(包括1个X染色体和1个Y染色体)。DNA碱基对31.6亿个,由DNA和核糖蛋白组成。单核苷酸多态性是指单核苷酸的多态性,也称为SNP。它是一种具有相同碱基的单核苷酸,对人体的遗传特性有一定的影响。
当前,人体DNA的大部分差异都是SNP上的差异。这一差异约为人体DNA碱基总量的0.5%。现在,SNP的研究报告很大一部分是基于SNP的。