dna提取试剂盒的操作步骤有哪些(dna提取试剂盒的注意事项)

 亲子鉴定问答    |      2023-11-15

dna的提取可以简单地分为两个步骤:裂化和净化。裂化是破坏样本细胞结构,使样本中的dna在裂化系统中自由流动的过程。净化是使dna与裂化系统中的其他成分完全分离的过程,如蛋白质、盐和其他杂质。通过破坏样本细胞结构,样本中的dna分散在裂化系统中,提取dna,使dna与裂化系统中的其他成分完全分离,使dna与裂化系统中的其他成分完全分离。

dna提取试剂盒的操作步骤有哪些(dna提取试剂盒的注意事项)

dna提取试剂盒的操作步骤:

1、样品处理:

a、在血样中加入2-3倍体积的血细胞裂解液,充分颠倒混合,12000rpm离心1min,小心清除,沉淀应为白色或浅红色,如果裂解不彻底,可重复上述步骤一次。在沉淀物中加入200ul溶液YA,冲击至完全混合。

b、如果处理过的血液是家禽、家禽、两栖或更低级生物的血液,其血细胞是核细胞,因此处理量为5-20u1,直接加入200ul溶液YA,直到完全混合。

2、在悬浮液中加入20ul的RNasea(10mg//ml),充分颠倒混合,室温放置10min。

3、加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分逆转混合,65℃水浴消化30-60min,消化时可逆转离心管多次混合,直至样品消化完全为止。

4、加入200ul溶液YB,再加入200ul无水乙醇,充分颠倒混合。此时可能会出现絮凝沉淀,不影响dna的提取。溶液和絮凝沉淀可加入吸附柱,室温为2min。

5、12000rpm离心2min,弃废水,将吸附柱放入收集管中。

6、在吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请检查是否加入无水乙醇),1200rpm离心1min,废水,将吸附柱放入收集管中。

7、在吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,废水,将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm离心2min,将吸附柱开口放置在室温或50℃温箱中几分钟,以去除吸附柱中残留的漂洗液,否则漂洗液中的酒精会影响酶切割、PCR等后续试验。

9、将吸附柱放入干净的离心管中,悬挂在吸附膜中央,滴入65℃水浴预热的50-200ul洗脱液,室温5min,1200rpm离心1min。

10、离心洗脱液可加入吸附柱,12000rpm离心2min,即可获得高质量的基因组dna。

提取dna试剂盒的注意事项:

样本的采集和存储是dna提取的第一步。适当的样本采集和存储方法对dna提取的成败尤为重要,尤其是一些有价值的样本,其采集和存储方法需要特别注意。